内蒙古亚博安泰生物科技有限公司

 服务热线:服务热线
  • 内蒙古亚博安泰生物科技有限公司
  • 内蒙古亚博安泰生物科技有限公司
  • 内蒙古亚博安泰生物科技有限公司
news
公司动态

新的色谱手艺能够提高我们对逆转录病毒传染的理解

  发布时间:2019-08-11 来源:亚博 [关闭]

亚博




         

因为它们同时表达,包膜病毒样颗粒(VLP)和细胞外囊泡(EV)难以区分和分手用于阐发目标。除了它们的共表达,EV和VLP表示出形态学,生物物理学和分子类似性。

内蒙古亚博安泰生物科技有限公司

为领会决这一分手挑战,研究人员比来设想了一种两步色谱法,能够分手VLPs和EV进行切确阐发。

开辟分手VLP和EV的方式的次要动机之一是进一步领会HIV等逆转录病毒传染。虽然确实具有病毒纯化方式,例如密度梯度离心,超滤或尺寸排阻色谱,但这些方式在分手EV和VLP的能力方面证明是低效的。

该新手艺基于先前利用肝素亲和层析作为分手VLP和EV的替代方式的工作。凡是,哺乳动物细胞培育上清液中高程度的肝素连系卵白在该一步法中合作连系位点。新的两步法可以或许在没有任何合作的环境下分手两种颗粒。该研究可为大规模病毒学研究铺平道路,研究EV和VLP的生物学感化。

方式

在Alois Jungbauer博士的率领下,该研究的研究人员开辟了一种两步色谱纯化手艺,起首从HEK 293细胞中收集HIV-1 gag VLPs和EVs。然后处置细胞,收集上清液并装入装有核 - 壳珠的柱子中。然后通过肝素亲和层析在第二步中进一步纯化从柱中收集的流体级分。然后在肝素亲和过程后收集第二组流体级分并阐发总卵白和双链DNA(dsDNA)含量。

用于分手,定量和阐发卵白质含量的阐发手艺包罗Bradford测定,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),Western印迹阐发和酶联免疫吸附测定(ELISA)。

通过利用纳米颗粒跟踪阐发(NTA)和透射电子显微镜(TEM)成像进行进一步的颗粒表征和尺寸分布阐发。

成果

在收集的液体部门中发觉EV的浓度光鲜明显更高,而在洗脱峰中发觉了VLP。不只新手艺可以或许精确地分手两种分子,还不雅察到VLP和EV在整个色谱过程中连结完整的球形。

瞻望

利用这种手艺,研究人员可以或许证明两步法能够将VLP亚博和EV分隔,从而能够零丁研究它们。他们但愿这种快速和可扩展的手艺能够使用于将来大规模出产VLP和EV,以更深切地领会这些分子的生物学功能。

称谢

本研究所做的工作获得了联邦数字和经济事务部,联邦运输,立异和手艺部,施蒂里亚贸易推进局SFG,Standortagentur Tirol,下奥地利州当局和ZIT - 手艺机构的支撑。维也纳市通过COMET帮助打算,由奥地利研究推进局FFG办理。

本文由亚博编辑整理